Obtención de Variantes Hiperactivas e Inactivas de la Endocelulasa Cel9 de Myxobacter Sp. Al-1

Abstract

Debido a su aplicación industrial, existe un gran interés en la producción de celulasas con propiedades bioquímicas novedosas. Por ello, en el presente trabajo se utilizó una estrategia basada en un método de mutagénesis aleatoria in vivo para la obtención de variantes de la endocelulasa Cel9 del microorganismo gram-negativo Myxobacter Sp. AL-1. Siguiendo este enfoque, se obtuvieron cepas transformantes de Escherichia coli capaces de secretar variantes de la proteína Cel9 cuyas actividades específicas fueron incrementadas hasta 7.5 veces con respecto a la actividad mostrada por la enzima nativa. Del mismo modo, se generaron cepas de E. coli productoras de variantes de la proteína Cel9 con baja o nula actividad enzimática. Experimentos de subclonación y fraccionamiento celular revelaron que las mutaciones asociadas con los fenotipos de las variantes de la enzima Cel9 ocurrieron en la secuencia del gen cel9. Así mismo, se demostró que los fenotipos de las cepas mutantes carentes de actividad enzimática no dependen de su incapacidad para secretar las proteínas mutantes. Además de su potencial aplicación biotecnológica, los resultados obtenidos en este trabajo permiten avanzar en el entendimiento de la relación estructura-función de la celulasa Cel9 de Myxobacter Sp. AL-1.