Análisis molecular de un baculovirus recombinante que expresa la proteína S de SARS-CoV-2

Abstract

Los baculovirus son excelentes vectores de expresión de genes eucarióticos y hasta la fecha, miles de baculovirus recombinantes se han producido en el sistema de expresión Bac to Bac. El objetivo de este trabajo fue la sobreexpresión del gen de la proteína S del SAR-COv-2, en el sistema Bac to Bac de baculovirus para producir grandes cantidades de esta proteína y poder utilizarla para la producción de anticuerpos en sistemas alternos, para la producción y escalamiento en el futuro, de una vacuna contra el SARS-CoV-2. Se partió de un baculovirus recombinante generado con el sistema Bac to Bac, denominado BackSpike. Se realizó la infección de larvas de Spodoptera frugiperda con los viriones recombinantes y se identificaron larvas que presentaron signos de infección a las 72 h.p.i, entre los cuales se incluyen: hemocitos con núcleos hipertrofiados y membranas disgregadas, sin presencia de cuerpos de oclusión. Se extrajo ADN de hemocitos y larvas completas donde se confirmó la presencia del gen de la proteína Spike, de 1000 pb, y la dirección del inserto, de 1200 pb, utilizando diseñados específicamente para esos dos fines. Para identificar a las dos subunidades de la proteína S del SARS-CoV-2 se realizaron geles de poliacrilamida al 12%. Se extrajo proteína total de larvas infectadas y de larvas sin infectar como control negativo, y se observaron 2 bandas de 65-70 kDa en las muestras de larvas infectadas que corresponden a las dos bandas en las cuales se escinde la proteína S durante el proceso de infección. Con el fin de analizar el potencial inmunogénico de la proteína S generada con el sistema Bac to Bac, se realizó una prueba rápida en un ejemplar de ratón hembra de la cepa BALB/c, llevando a cabo tres inoculaciones de la proteína S con adyuvante de Freund. En las pruebas de las características nociceptivas, el peso del ratón mostró una tendencia al alza hasta el día 14 post inmunización, seguido de una ligera disminución. La temperatura corporal se mantuvo estable con una ligera hipotermia después de la tercera inmunización. Por su parte, la reacción a estímulos mecánicos disminuyó solo después de la tercera inoculación, y la respuesta del reflejo pupilar a la luz disminuyó después de la segunda inmunización. Los ensayos de ELISA mostraron producción de anticuerpos anti-IgG contra la proteína S de SARS-CoV-2. El sistema Bac to Bac de baculovirus presentó deficiencias para la expresión de la proteína S del SARS-CoV-2, ésta se pudo expresar en bajas cantidades, sin embargo, desarrolló respuesta inmunogénica en el ratón infectado. Es necesario realizar más pruebas inmunológicas para analizar su efectividad.