Localización intracelular de proteínas involucradas en el proceso patogénico de Metarhizium anisopliae

Abstract

Metarhizium anisopliae es un hongo entomopatógeno comúnmente aislado de suelos e insectos de todos los continentes, excepto la Antártida y es capaz de matar al menos siete órdenes de insectos. Su metabolismo le permite crecer en escases de nutrientes y en presencia de compuestos tóxicos para otros hongos. Sin embargo, el tiempo que tarda en matar al insecto plaga es prolongado, lo cual limita drásticamente sus aplicaciones. Por esta razón se han realizado diversos estudios con el propósito de encontrar posibles nuevos factores de virulencia que permitan aumentar su capacidad patogénica. Entre estos, en nuestro grupo se han aislado 6 genes que codifican proteínas con actividad de 2 nitropropano dioxigenasa. Con el fin de avanzar en el conocimiento de la función de estos genes. En este proyecto se planteó la localización intracelular de proteínas codificadas por estos genes 2np, mediante fusiones génicas con proteínas fluorescente, para ello se utilizaron transformantes de S. cerevisiae como receptores de las fusiones génicas 2np-mCherry. Mediante microscopia de fluorescencia se analizó su localización intracelular. Por último, se realizó el etiquetamiento del gen PEX16 con el gen GFP mediante amplificación de los fragmentos mediante PCR y la posterior fusión de los mismos mediante PCR de fusión.