Determinación de 8-Hidroxideoxiguanosina en el Adn Mitocondrial por Pcr en Tiempo Real

Abstract

Introducción. El estrés oxidativo daña al ADN por la oxidación de la base guanina y la subsecuente formación de 8-hidroxideoxiguanosina (8-OHdG). Debido a que el genoma mitocondrial no cuenta con los sistemas de reparación del ADN nuclear, el ADN mitocondrial (ADNmt) es más susceptible a sufrir daños los cuales se asocian al riesgo de desarrollar enfermedades como la diabetes y el cáncer. Materiales y métodos. A partir de una genoteca de niños de Salamanca, se estandarizó el método para la determinación de 8-OHdG el cual se llevó a cabo mediante la amplificación de un fragmento de ADN mitocondrial utilizando los oligos MTF3212 y MTR3319 en muestras tratadas y no tratadas con la enzima reparadora 8-oxoguanina ADN glicosilasa de humanos (hOGG1), la cual remueve los residuos de 8-OHdG retardando los ciclos de amplificación (Cq); este valor de diferencia entre los Cq se definió como Delta Cq. Resultados. Se amplificó un fragmento de ADN mitocondrial con los oligos utilizados, MTF3212 y MTR3319; y el valor de Cq mostró un decremento después de tratar el ADN con la enzima hOGG1 a diferentes concentraciones (1 – 10 U por reacción; P<0.05). Las muestras se trataron por triplicado aceptando solo aquellos promedios de Cq cuyos coeficientes de variación (C.V.) fueran menores al 1 %. Conclusiones. La 8-hidrodeoxiguanosina es un biomarcador del estrés oxidativo que puede ser cuantificado por qPCR permitiendo reconocer este impacto a nivel del genoma mitocondrial.