Caracterización de las mitocondrias de Saccharomyces cerevisiae que expresan la enzima de Entamoeba histolytica EhToxin-like

Abstract

Entamoeba histolytica es el protozoario parásito que causa la amebiasis en los seres humanos, esta infección es la 6° causa de morbilidad entre las enfermedades transmisibles en México. La amebiasis intestinal es una enfermedad diarreica que empeora la nutrición en niños, sobre todo aquellos con baja ingesta alimenticia. En el genoma de E. histolytica está codificada una enzima denominada EhToxin-like que tiene estructura y actividad enzimática similares a la toxina diftérica; in vitro ésta modifica el factor de alargamiento de la síntesis de proteínas EF-Tu de Escherichia coli. Como el factor EF-Tu además de estar involucrado en la síntesis de proteínas en bacterias también participa en la síntesis de proteínas mitocondriales, nuestro grupo de investigación está estudiando el efecto de EhToxin-like en levaduras, como modelo de células eucariontes. En esta investigación se analizó el efecto que tiene la enzima EhToxin-like en las mitocondrias de Saccharomyces cerevisiae. Para analizar el posible efecto de EhToxin-like, se utilizaron tres cepas de S. cerevisiae: una transformada con el vector vacío en donde no se expresa la enzima, ésta se denominó pYES2 y fue utilizada como control; la segunda cepa es la que expresa la enzima EhToxin-like y la tercera posee una mutación en el aminoácido 354, cambiando el ácido glutámico por glutamina, ésta se nombró EhTox E354Q. Para el análisis se utilizaron cepas recién cosechadas crecidas en medio mínimo con glucosa, condición no inductora para la expresión de EhToxin-like, o en el mismo medio con galactosa para inducir la expresión de EhToxin-like y de la mutante EhTox-E354Q. Se tiñeron con Mitotracker-red CMXRos las mitocondrias de las tres cepas de S. cerevisiae en las diferentes condiciones de crecimiento y se observaron por microscopia confocal. Las mitocondrias de levaduras que expresan EhToxin-like se observaron más pequeñas y con una tinción difusa comparadas con la cepa de S. cerevisiae que está transformada con el vector pYES2 vacío. Además, las cepas que expresan EhToxin-like son de menor tamaño que la cepa control