Generación y caracterización de una cepa recombinante de bacillus thuringiensis que exprese una versión truncada de la endoquitinasa chia74

Abstract

Bacillus thuringiensises el bioinsecticida más conocido y empleado del mundo. Su actividad se debe principalmente, al efecto de proteínas Cry y Cyt, las cuales actúan de manera sinérgica con otras biomoléculas tales como quitinasas, proteínas insecticidas vegetativas, proteasas, parasporinas y bacteriocinas. Las quitinasas, en particular, son secretadas por B. thuringiensispara hidrolizar la quitina para su uso como fuentes de carbono y nitrógeno. ChiA74, una endoquitinasa de B. thuringiensis,tiene una estructura modular que incluye una secuencia de péptido señal de secreción (sp), y los dominios catalítico (CD), de inserción de quitina (CID), fibronectina de tipo III (FnIII) y de unión a quitina (CBD).Por medio de técnicas de PCR y ligación de los productos generados, además del uso de enzimas de restricción, se genera rondos versiones truncadas de chiA74 sin péptido señal que,además carecen respectivamente delos dominios CBD yCDB –FnIII, las cuales se clonaron en la cepas Top 10 y ET-1256 de E.coliy, finalmente en HD1 de B. thuringiensispara su caracterización por medio de geles de poliacrilamida para proteínas y zimogramas con el fin de analizar la actividad enzimática de ambas versiones truncadas de la endoquitinasa, obteniendo como resultado la expresión de ambas