Óxido de etileno como agente glicante: estudio analítico

Abstract

El objetivo de este trabajo de tesis es obtener nuevas evidencias del papel de óxido de etileno (EtO) como agente glicante mediante el análisis de las modificaciones en la secuencia de aminoácidos de la albúmina (HSA) causadas por EtO, utilizando diversas técnicas de espectrometría de masas. Inicialmente se diseñaron condiciones in vitro para llevar a cabo la modificación estructural de cinco aminoácidos (Cys, Lys, Arg, His y Met) por acción del EtO [1], para esto, se prepararon soluciones individuales de los aminoácidos en tampón de bicarbonato de amonio pH 7.8 y se incubaron a 37 °C por 24 h con EtO en exceso molar de 5. En paralelo, se obtuvieron muestras control, repitiendo el procedimiento sin agregar EtO. Todas mezclas de reacción se analizaron por ESI-QTOF-MS en modo positivo y negativo para adquirir los espectros de MS y MS/MS. Los datos obtenidos fueron abiertos en DataAnalysis 4.1, donde se realizó la recalibración y extracción de las señales basadas en espectros de MS y autoMS/MS. Con base en el análisis de datos, se estableció como orden de susceptibilidad a la hidroxietilación: Cys > Met > His > Lys > Arg. Gracias a esta información se identificaron como principales blancos de glicación: el grupo tiol en Cys, ε-amino en Lys, guanidino en Arg y α-amino en His y Met. Puesto que los grupos α-amino están implicados en enlaces peptídicos, se descartaron His y Met como posibles blancos de glicación. Para llevar a cabo la modificación de HSA por EtO, se emplearon condiciones similares a las aplicadas en los aminoácidos, pero con excesos molares de 100 y 1 000 de EtO, así como un control. Para verificar si la modificación ocurre bajo las condiciones diseñadas, se obtuvieron los espectros de masas de HSA incubada con EtO y HSA control utilizando el sistema MALDI-TOF-MS.