Comparación de proteínas fúngicas secretadas por el aislado fungico a7 bajo diferentes condiciones de cultivo.

Abstract

En este trabajo, se presenta la comparación de la actividad de dos glucosidasas secretadas por un aislado fúngico denominado A7, el cual pertenece a un consorcio microbiano que degrada polímeros plásticos en suspensión. Se caracterizaron morfológicamente las colonias del aislado fúngico crecido en los medios de cultivo agar dextrosa papa (PDA), agar dextrosa-extracto de levadura-peptona (YPD) y agar medio mínimo de Mathur sales (MMM), los cuales se incubaron durante 7 días a 28 °C. La caracterización microscópica del hongo se realizó en microcultivos que se tiñeron con azul de lactofenol. Para determinar la capacidad del hongo para aprovechar como fuente de carbono diferentes polímeros naturales o sintéticos, el asilado se cultivó a 28 °C en MMM adicionado con diferentes polímeros naturales o sintéticos (0.1% p/v), como fuente de carbono y, utilizando un cultivo control adicionado con glucosa (GLC). Después de 2 semanas de incubación, se observó el crecimiento fúngico, mayoritariamente en el cultivo control y, en orden decreciente a los realizados con celofán dulce (CD), carboximetilcelulosa (CMC), celulosa cristalina (CEL), tereftalato de polietileno (PET), poliestireno (PS), polietileno de alta densidad (PE) o celofán amargo (CA). Se analizó la actividad enzimática y la proteína secretadas en cultivos realizados en condiciones estáticas ode agitación (120 rpm), durante 21 días a 28 ºC, adicionando al MMM los diferentes polímerosnaturales (0.1% p/v). Cada semana se recuperó un cultivo representativo y se determinó, en el sobrenadante libre de células, la actividad de glucosidasa y celobiosidasa utilizando sustratos unidos a 4-metilumbelliferona (4MU). La proteína secretada se determinó por la técnica de Lowry y el patrón de proteínas en geles SDS-PAGE al 10%. Nuestros resultados muestran que el asilado fúngico tuvo un mayor crecimiento radial en YPD>PDA>MMM, con morfología colonial dependiente del medio de cultivo empleado. Microscópicamente, se observó un micelio septado, con conidióforos y fiálides conteniendo conidios redondos; sugiriendo un hongo del género Penicillium. La proteína secretada fue mayor en condiciones de cultivo estático y el perfil electroforético mostró la secreción diferencial de proteínas, con pesos moleculares de 108 - 18 kDa, dependiendo del sustrato utilizado como fuente de carbono, observándose que el sustrato que indujo la mayor actividad de β-glucosidasa y celobiosidasa fue la CMC. Con base en estos resultados, se ha iniciado la caracterización molecular del aislado A7 y la purificación de la actividad enzimática secretada durante su crecimiento en CMC y en un futuro determinar su posible aplicación biotecnológica.