Análisis funcional de esfingomielinasas neutras de Entamoeba histolytica

Abstract

La virulencia de Entamoeba histolytica es un proceso multifactorial, en el que están involucrados factores tanto del hospedero como de la amiba. Entre los factores del parásito se encuentran los amebaporos, las cisteín proteasas y la lectina; sin embargo, no se descarta la participación de otras moléculas. Algunas de estas moléculas candidatas son las esfingomielinasas (SMasas), enzimas que catalizan la hidrólisis de esfingomielina (SM) produciendo ceramida, la cual está involucrada en diferentes procesos celulares como proliferación celular, apoptosis y lisis celular. En el grupo de trabajo se ha reportado que el genoma de E. histolytica posee tres genes que codifican para SMasas neutras, los cuales se expresan y producen proteínas con actividad enzimática. El objetivo del presente es el análisis funcional de las SMasas neutras, para lo cual se obtuvieron trofozoítos transfectantes para silenciar o sobreexpresar los genes que codifican para dichas enzimas. Se encontró que la actividad de SMasa neutra disminuye con el silenciamiento de los genes y aumenta con su sobrexpresión, lo que permitió evaluar su participación en la virulencia del parásito. La nSMasa3 está asociada con la muerte y lisis celular, mientras que la nSMasa1 y nSMasa2 con la destrucción de monocapas celulares. Mediante ensayos de inmunodetección y microscopía confocal se encontró que estas proteínas están asociadas principalmente a la membrana plasmática, lo que sugiere que el efecto citotóxico y citolítico es dependiente de contacto. La actividad de nSMasa aumentó en amibas expuestas a H2O2, radiación UV-C o choque térmico, sin embargo, las cepas sobre-expresantes no mostraron cambios en su actividad. Esta es la primera vez que se demuestra la participación de las nSMasas en la virulencia de E. histolytica, principalmente de la Ehnsm3.