Obtención de una construcción para expresar Heterólogamente al gen MFD de Bacillus Subtilis

Abstract

Mfd es una proteína multifuncional que, además de jugar un papel central en el acoplamiento de las maquinarias de transcripción y del sistema de reparación por escisión de nucleótidos (NER), ha sido involucrada en el proceso de mutagénesis adaptativa en células de Bacillus subtilis sometidas a estrés nutricional. Se amplificó el marco de lectura abierto (ORF) de mfd de B. subtilis utilizando la técnica de PCR, para posteriormente clonarlo en el vector de expresión pET28b, la construcción fue verificada mediante un análisis con enzimas de restricción. El vector de expresión inserta una etiqueta de 6 histidinas (His6) al producto generado, lo que permitirá purificarlo mediante cromatografía de afinidad metálica y en el futuro determinar aspectos estructurales y funcionales de la proteína recombinante His6-Mfd.