Detección molecular de Entamoeba histolytica

Abstract

La amibiasis es una infección ocasionada por el protozoario parásito Entamoeba histolytica, responsable de 40,000 a 100,000 muertes por año a nivel mundial, lo que la sitúa como una de las principales causas de muerte por parasitosis alrededor del mundo. Las técnicas tradicionales de detección del parásito son poco sensibles, generando falsos negativos y no distinguen con certeza a las diferentes especies de Entamoeba. Por lo anterior, se implementó un método basado en la PCR para la detección del parásito. Se emplearon 5 cepas de E. histolytica cultivadas en el laboratorio con diferentes características y fondos genéticos. Para la detección se utilizó la técnica de PCR y dos pares de oligonucleótidos específicos para E. histolytica previamente reportados. Para determinar la sensibilidad de la técnica de PCR se utilizó DNA genómico purificado de cada cepa. Los resultados indican que es posible detectar hasta 1 pg de DNA de cada una de las cepas. Asimismo, se evaluó la especificidad empleando DNA purificado del protozoario parásito Trichomonas vaginalis y de la bacteria Pseudomonas aeruginosa. Se encontró que los oligonucleótidos utilizados son específicos para E. histolytica, ya que sólo se obtuvo amplificación con DNA de amibas y no con DNA de tricomonas o bacterias. Finalmente, se evaluaron extractos crudos de los trofozoítos de E. histolytica como fuente de templado, encontrando que técnicamente se puede detectar hasta una amiba. El sistema de detección implementado presenta una alta sensibilidad y es específico para E. histolytica. Una vez que se ha validado el sistema experimental, el siguiente paso sería usar muestras clínicas.